可在不同的液體中,包括血清或唾液等復雜的液體中,對抗體-抗原相互作用和進行動態(tài)測量。
SPR用于抗體的表征
SPR是一個敏感的平臺,可以確定抗體或片段與抗原的相互作用,并直接測量相互作用的親和力和動力學。SPR儀器還可以直接測量脂質體和活細胞等相關目標分子,并且反應其自然狀態(tài)下的相互作用。可以在不同的液體中進行其相互作用測量,包括100%的血清,血漿或細胞生長介質等。SPR提供了抗體的構象和方向的一些信息。
選擇SPR用于抗體的表征的優(yōu)勢
1. 免標記的親和力和動力學測試
2. 低成本
3. 抗體構象變化
4. 天然樣品(100%血清)
5. 生物制藥,甚至來自于細胞介質的藥
6. 簡單地準備表面?zhèn)鞲衅?/span>
SPR可以回答的關于抗體的關鍵問題
1. 抗體與抗原的親和力和結合動力學參數(shù)
2. 用于免疫分析的最佳抗體是什么?
3. 在脂質環(huán)境中與受體結合最佳的抗體是什么?
4. 在活細胞中哪個細胞信號是由抗體激活的?
5. 分子X與Y的結合和離解動力學有多快?
6. 哪一種單克隆抗體具有最高的親和力?
用SPR測量的抗體和抗原相互作用
蛋白質-抗體相互作用是制藥工業(yè)和蛋白質研究領域的重要研究領域?;诳贵w的生物技術藥物已被證明是治療幾種頑固性疾病的有效方法。SPR是決定分子相互作用的靈敏工具。實時和標簽自由測量不僅提供了有關親和力的信息,還提供了研究系統(tǒng)動力學的信息。各種固定的固定協(xié)議可以用來在傳感器表面上黏合分子,因此方法適用于廣泛的分子。人類血清白蛋白(HSA)被固定在羧甲基葡聚糖(CMD)傳感器表面,與胺偶聯(lián)化學反應。測定了人類血清白蛋白抗體(抗HSA)與固定HSA的相互作用。通過對四種不同的抗hsa濃度的相互作用,計算了該結合的親和力和動力學。正如預期的抗HhasHSA緊密結合,復雜的離解率非常慢。
結合動力學的抗體
pkc(蛋白激酶c)與癌癥、II型糖尿病和阿爾茨海默氏病有關。因此,pkc的抑制劑和激活劑有望用于研究和藥物開發(fā)。Llama單鏈抗體(VHHs)是一種新的單克隆抗體,可以特別激活或抑制人類的pkc。在標準的金傳感器上,羧甲基化的葡聚糖水凝膠是自合成的。用SPR測量了動力學,并對SPR進行了跟蹤分析。測量以固定角度模式進行。在此過程中,采用了一階或二階階的朗繆爾綁定模型,并確定了關聯(lián)和解離常數(shù)。用SPR測定的pkc激酶的活化和抑制動力學與體內的pkca HeLa細胞的轉位有良好的相關性。結果表明,將VHHs與pkc構象結合,因此在SPR測量中,蛋白質定位的作用是重要的。